ELISA平臺

抗體親和力測定

在ELISA平臺上利用p-tau181抗原分別檢測p-tau181兔單克隆抗體H484c7、R486c5，EC50分別為6.97ng/mL、0.91ng/mL。

圖1. A35R抗體（R383e5）ELISA檢測結果

圖2. A35R抗體（R387c6）ELISA檢測結果

時間分辨免疫熒光平臺

抗原檢測

將p-tau181合成抗原進行梯度稀釋（濃度范圍0~50000pg/mL），用p-tau181抗體H484c7、R486c5進行檢測。

圖3. p-tau181抗原檢測結果

序號	抗原濃度 (pg/mL)	T/C值
1	0	0.002292977
2	50	0.006239696
3	100	0.008851572
4	200	0.015496176
5	400	0.02941394
6	2000	0.132607819
7	10000	0.560873943
8	50000	1.29634341

表1. p-tau181抗原檢測數據

微管相關蛋白（Tau）是20世紀70年代中期通過研究微管形成所需的因素發現的。Tau蛋白促進微管蛋白組裝成微管（神經元細胞骨架的主要組成部分，定義正常形態并為神經元提供結構支持）。Tau由17號染色體上的MAPT基因編碼，長度超過100kb，包含16個外顯子。外顯子1是啟動子的一部分，被轉錄但不翻譯。外顯子1、4、5、7、9、11、12和13是組成型外顯子。外顯子2、3和10交替剪接并在成人大腦中表現出來。外顯子2可以單獨出現，但外顯子3不會獨立于外顯子2出現。在中樞神經系統中，外顯子2、3和10的選擇性剪接產生6種tau亞型，這些亞型在大腦發育過程中差異表達。

Tau與微管蛋白結合受其磷酸化狀態的調節，磷酸化是調控tau結構和功能的重要翻譯后修飾，主要發生在絲氨酸（Ser）和蘇氨酸（Thr）殘基和部分酪氨酸（Tyr）殘基上。正常成熟腦內tau蛋白磷酸化位點很少，平均只有2、3個，而AD患者腦中Tau蛋白磷酸化位點高達40個以上。成人腦組織中最長的Tau蛋白異構體形式（Tau441）共含有80個Ser和Thr殘基，這些殘基都是潛在的磷酸化修飾位點，其中Thr²³¹、Ser²⁶²的磷酸化直接影響了tau蛋白與微管的結合。磷酸化狀態通常由激酶和磷酸酶對tau分子的協調作用進行調節。在病理條件下，例如AD的情況，tau蛋白的異常磷酸化不僅會降低其微管蛋白結合能力，導致微管解體，還會以神經原纖維纏結（NFT）的形式自我聚合和聚集。