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  2. 25-羥基維生素D（25-OH-VD）

25-羥基維生素D（25-OH-VD）

該系列產品已獲得發明專利，專利號為ZL202311497182.3。

產品參數

產品參數

名稱 25-羥基維生素D抗體（25-OH-VD antibody）
貨號 R483k3 R484j4
類型 單克隆抗體
宿主 兔
反應物種 人
應用平臺
推薦配對		 化學發光 免疫層析
R484j4（捕獲）-R483k3（檢測） R483k3（捕獲）-R484j4（檢測）
純度 Protein A/G純化，純度>95%
緩沖液 1xPBS，pH 7.4
儲存 -20℃或更低溫度，分裝保存，避免反復凍融

標記抗體及抗體偶聯磁珠

名稱 貨號 標記/偶聯 推薦配對 推薦平臺
25-羥基維生素D夾心法
（25-OH-VD）標記抗體		 L216u1 AE L217u1（捕獲）
L216u1（檢測）		 化學發光（AE）
L217u1 Biotin
25-羥基維生素D夾心法
（25-OH-VD）抗體偶聯磁珠		 B200t1 羧基（COOH）
修飾磁珠		 B200t1（捕獲）
L216u1（檢測）
B201t1 對甲苯磺酰基（Tosyl）
修飾磁珠		 B201t1（捕獲）
L216u1（檢測）
B202t1 鏈霉親和素（SA）
修飾磁珠		 B202t1（捕獲）
L216u1（檢測）

發光大包裝試劑

名稱 貨號 推薦平臺 方法學
25-羥基維生素D（25-OH-VD）發光大包裝試劑 Q80h1 化學發光（AE） 夾心法

解離劑

名稱 貨號 推薦平臺 樣本稀釋比例
25-羥基維生素D（25-OH-VD）中性解離劑 D10a1 化學發光（AE、ALP） 10:50
產品數據

產品數據

vd
vd
vd
vd

1.校準曲線——化學發光（AE）平臺

用V2.0版、V3.0版25-OH-VD大包裝試劑（Q80h1）分別檢測濃度范圍為0-147.04ng/mL的25-OH-VD校準品，升級后的信噪增益幅度顯著提升，尤其是低端。

校準品 濃度
（ng/mL）		 Q80h1-V2.0版
?RLU		 Q80h1-V3.0版
RLU
S1 0.00 254 988
S2 0.53 7866 55199
S3 2.45 48364 172199
S4 8.97 137856 363852
S5 27.55 835688 1358846
S6 66.23 2596874 2864657
S7 147.04 5986321 6336428

表1.VD校準曲線數據

2.靈敏度——化學發光（AE）平臺

用V2.0版、V3.0版Q80h1分別對零濃度稀釋液重復測定20次，計算最低檢測限，結果顯示升級后的Q80h1低端檢測靈敏度顯著提升。

名稱 濃度
（ng/mL）		 RLU平均值 線性方程
校準品S1 0 254 y=14362x+254
校準品S2 0.53 7866
20次重復測定零濃度稀釋液RLU值
658 433 332 448
455 538 465 432
369 579 483 695
488 661 224 455
493 577 269 387
RLU均值 472
SD 124.0
平均值+2SD 720
最低檢測限（ng/mL） 0.032

表2.最低檢測限（Q80h1-V2.0版）

名稱 濃度
（ng/mL）		 RLU平均值 線性方程
校準品S1 0 988 y=102285x+988
校準品S2 0.53 55199
20次重復測定零濃度稀釋液RLU值
1033 946 1103 894
1055 973 964 1022
1084 966 933 1036
1058 1024 964 1055
998 1138 1105 1094
RLU均值 1022
SD 66.0
平均值+2SD 1154
最低檢測限（ng/mL） 0.002

表3.最低檢測限（Q80h1-V3.0版）

3.相關性——化學發光（AE）平臺

用V2.0版、V3.0版Q80h1分別檢測82例質譜賦值樣本（濃度范圍7.69~57ng/mL），樣本符合率（R2）分別為0.951和0.9803，升級后樣本符合率顯著提升。

VD臨床對比分析（質譜賦值-V2.0版）

圖1.VD臨床對比分析（質譜賦值-V2.0版）

VD臨床對比分析（質譜賦值-V3.0版）

圖2.VD臨床對比分析（質譜賦值-V3.0版）

編號 樣本濃度
（ng/mL）		 檢測濃度
（ng/mL）
1 7.69 6.34
2 8.35 7.48
3 8.94 8.11
? ? ?
81 49.08 51.31
82 57 55.94

表4.VD臨床對比分析數據（質譜賦值-V2.0版）

編號 樣本濃度
（ng/mL）		 檢測濃度
（ng/mL）
1 7.69 7.68
2 8.35 7.66
3 8.94 8.47
? ? ?
81 49.08 50.08
82 57 56.95

表5.VD臨床對比分析數據（質譜賦值-V3.0版）

4.試劑37℃7天熱加速穩定性——化學發光（AE）平臺

將V2.0版、V3.0版Q80h1放置在37℃條件下，分別在0、7天時，去檢測低值和高值質控品。V2.0版試劑測得的低值質控品濃度7天跌幅為8%，高值質控品跌幅9.92%。V3.0版試劑測得的低值質控品7天跌幅為3%，高值質控品跌幅2.18%。升級后的Q80h1熱加速穩定性大幅提升。

試劑37℃7天熱加速穩定性（低值質控）

圖3.試劑37℃7天熱加速穩定性（低值質控）

試劑37℃7天熱加速穩定性（高值質控）

圖4.試劑37℃7天熱加速穩定性（高值質控）

5.校準品穩定性——化學發光（AE）平臺

由于小分子不穩定，市面上主流的VD檢測試劑配套校準品多采用凍干技術儲存，通常凍干后復溶穩定性無法保障，且成本高。歐凱V3.0版25-OH-VD大包裝試劑配備的是液體校準品，無需凍干，且開瓶穩定（見圖5、6），機載友好；2-8℃至少可以保存1年。此外，校準品37℃7天熱加速穩定性也依然優秀，低值跌幅為3.2%，高值跌幅為2.4%（未展示）。

低值校準品28天開瓶穩定性

圖5.低值校準品28天開瓶穩定性

高值校準品28天開瓶穩定性

圖6.高值校準品28天開瓶穩定性

vd

為滿足客戶需求，打造高品質試劑，結合市場調研和用戶反饋意見，南京歐凱生物對25-OH-VD發光大包裝試劑（Q80h1）的核心原料及試劑性能進行了全方位的優化。升級版Q80h1試劑檢測靈敏度與線性兼具；在降低非特異性背景噪音的同時，大幅提高信號強度。與初代試劑相比，整體信噪比提升約45倍。

性能看點
性能看點

1.超強信噪比

Q80h1采用新一代小分子夾心檢測技術，其檢測靈敏度和特異性都顯著優于競爭法，但在線性和背景噪音方面卻仍有優化空間。為此，我們對Q80h1的核心原料進行了升級，升級后的背景噪音有效降低，信號增益幅度更大，區分度也更高。低端信噪比提升了15倍，高端信噪比提升了近45倍。

校準品 濃度
（ng/mL）		 RLU
S1 0.00 195
S2 1.15 12217
S3 3.44 26591
S4 15.71 208683
S5 31.91 842490
S6 70.33 2731118
S7 153.86 6567286
S2/S1 62.65
S6/S1 14005.73

表1.25-OH-VD信噪比（升級后）

校準品 濃度
（ng/mL）		 RLU
S1 0.00 14776
S2 0.22 19850
S3 1.08 55912
S4 10.27 534999
S5 45.02 2464797
S6 75.15 4585520
S3/S1 3.78
S6/S1 310.34

表2.25-OH-VD信噪比（升級前）

2. 比標質譜金標準

用Q80h1檢測106例質譜賦值樣本（濃度范圍7.69~57ng/mL），樣本符合率（R2）可達0.9645。

編號 質譜檢測濃度
（ng/mL)）		 自測濃度
（ng/mL）
1 7.69 6.89
2 8.35 9.8
3 8.94 10.21
? ? ?
105 49.08 54.77
106 57 54.38

表3.VD臨床對比分析數據（質譜賦值）

VD臨床對比分析（質譜賦值）

圖1.VD臨床對比分析（質譜賦值）

3. 檢測VD2高濃度樣本同樣精準

臨床研究顯示：市售五大主流品牌（雅培、DiaSorin、IDS、羅氏、西門子）的25-OH-VD檢測試劑與LC-MS/MS檢測結果臨床判定一致率不到71%。當樣本中含有25-OH-VD2時，與LC-MS/MS檢測結果的相關性更低。

為驗證Q80h1對含有高濃度25-OH-VD2樣本的檢測能力，我們選取了11例25-OH-VD2含量明顯高于25-OH-VD3的VD質譜賦值樣本。用Q80h1和一款市售主流競爭法VD試劑同時對這些樣本進行檢測。結果顯示：Q80h1的檢測結果與質譜符合率依然很高（R2=0.939），而競爭法檢測結果與Q80h1、質譜均存在明顯偏差。

編
號		 質譜檢測濃度（ng/mL)） 歐凱
檢測濃度
（ng/mL）		 競爭法
檢測濃度
（ng/mL）
25-OH-VD2 25-OH-VD3 總25-OH-VD
1 10.42 6.43 16.85 17.63 46.7
2 13.12 4.68 17.80 21.3 53.2
3 12.9 7.64 20.54 22.98 31.8
4 16.7 10.6 27.3 28.88 41.2
5 21.37 8.8 30.16 31.06 21.4
6 24.53 10.17 34.7 35.94 17.1
7 19 15.9 34.9 41.18 24.9
8 24.14 15.88 40.02 38.44 61.8
9 32.8 7.8 40.6 38.32 84.3
10 29.2 12.42 41.62 40.3 54.8
11 25.26 16.4 41.66 42.65 31.2

表4.VD臨床對比分析數據（質譜賦值VD2高濃度樣本）

化學發光平臺（AE）

1.總25-OH-VD識別能力

25-OH-VD抗體對25-OH-VD2的識別能力直接影響總25-OH-VD檢測結果的準確性。經驗證歐凱25-OH-VD發光大包裝試劑（Q80h1）與25-OH-VD2、25-OH-VD3有很好的反應性，可有效識別樣本中的總25-OH-VD。

濃度
（ng/mL）		 RLU
25-OH-VD2 25-OH-VD3
0.00 201 213
5.03 33900 21043
15.16 228481 155393
35.43 951458 780271
70.12 2720547 2188499
150.73 6429867 5647803

表5.總25-OH-VD識別能力數據

總25-OH-VD識別能力

圖2.總25-OH-VD識別能力

2.最低檢測限

用Q80h1對零濃度稀釋液重復測定20次，計算最低檢測限。

名稱 濃度（ng/mL） RLU平均值 線性方程
校準品S1 0.00 195 y=10454x+195
校準品S2 1.15 12217
零濃度稀釋液20次重復測定RLU值
213 231 198 245
205 241 193 265
230 205 249 232
232 232 208 322
225 216 230 316
RLU均值 234
SD 34.1
平均值+2SD 303
最低檢測限（ng/mL） 0.010

表6.VD發光大包裝試劑最低檢測限

3.線性

將濃度為148ng/mL的質譜賦值高濃度樣本用樣本稀釋液稀釋為50%、20%、10%、5%和1%五個濃度。用Q80h1對高濃度樣本及五個稀釋樣本進行檢測，計算相關性。

百分比 濃度（ng/mL） RLU 絕對偏差 相對偏差
100% 148 6399087 / 0.60%
50% 71.3 2961553 / -3.10%
20% 30.9 754539 / 4.70%
10% 14.2 190843 -0.62 /
5% 8.30 60302 0.83 /
1% 1.41 15120 -0.18 /
相關性：0.99971

表7.VD發光大包裝試劑線性

4.重復性

利用同一批Q80h1對濃度為10.26ng/mL和50.31ng/mL的質譜賦值樣本各重復檢測10次，其測量濃度變異系數（CV）均小于3%。

低值樣本
測定值編號 RLU 濃度（ng/mL）
1 97500 10.32
2 96880 10.28
3 94734 10.14
4 97811 10.34
5 93522 10.06
6 94886 10.15
7 104663 10.77
8 97966 10.35
9 95344 10.18
10 107463 10.94
平均值 / 10.35
標準差 / 0.28
CV 2.7%

表8.VD發光大包裝試劑重復性（低值）

高值樣本
測定值編號 RLU 濃度（ng/mL）
1 1731067 50.24
2 1810231 51.83
3 1752956 50.68
4 1713169 49.88
5 1785816 51.34
6 1738030 50.38
7 1741512 50.45
8 1762412 50.87
9 1726412 50.14
10 1726094 50.31
平均值 / 50.61
標準差 / 0.592
CV 1.17%

表9.VD發光大包裝試劑重復性（高值）

5.準確度

將濃度為50.31ng/mL的質譜賦值高濃度樣本，按照1：9的體積比加入到濃度為10.15ng/mL的低濃度血清中，配制成濃度為14.17ng/mL的混合物，用Q80h1進行檢測，計算回收率。

待測物 測定濃度（ng/mL） RLU 濃度平均值
（ng/mL）
高濃度樣本 50.35 1736538 50.42
50.22 1730072
50.68 1752956
低濃度血清 10.12 94430 10.22
10.21 95803
10.34 97811
混合物 14.16 170846 14.26
14.32 174539
14.29 173842
回收率 100.28%

表10.VD發光大包裝試劑回收率

6.熱穩定性

將Q80h1試劑組份分別放置于37℃培養箱和4℃冰箱中加速7天，分別測試高、低值樣本，比較其偏差。

低值樣本
測定值
編號		 RLU 濃度（ng/mL）
4℃7天 37℃7天 4℃7天 37℃7天
1 93071 84504 10.03 9.44
2 94886 85490 10.15 9.51
3 92921 85207 10.02 9.49
偏差 / -5.8%

表11.VD發光大包裝試劑熱穩定性（低值）

高值樣本
測定值
編號		 RLU 濃度（ng/mL）
4℃7天 37℃7天 4℃7天 37℃7天
1 1736040 1635741 50.34 48.32
2 1725100 1637724 50.12 48.36
3 1738527 1632272 50.39 48.25
偏差 / -4.1%

表12.VD發光大包裝試劑熱穩定性（高值）

試用申請

試用申請

填寫試用申請
臨床意義

VD臨床診斷意義

維生素D（Vitamin D，VD）是人體健康、生長和發育必不可少的物質，其缺乏或過量與多種疾病密切相關，如骨骼肌肉疾病、呼吸系統疾病、心血管疾病、免疫性疾病、腎臟疾病、神經精神疾病等。

維生素D是一種類固醇激素, 通過調節腸道吸收和腎臟重吸收作用維持機體的鈣平衡。維生素D主要包括2種類型：維生素D2（VD2）和維生素D3（VD3），VD2主要通過攝取食物獲得（約占VD總量的10%），VD3主要通過日光中的紫外線照射皮膚產生。體內維生素D通過與白蛋白和VD結合蛋白結合后經血液運送至肝臟, 在肝臟分泌的25-羥化酶的參與下, 25號位羥化過程并形成25-（OH）-VD。在腎臟中, 25-（OH）-VD進一步被1α -羥化酶轉化成具有生物活性的1, 25（OH）2VD3（1, 25-dihydroxyvitamin D3, 又稱骨化三醇）。最后在DBP轉運蛋白的載運下，經血液到達小腸、骨等靶器官中與靶器官的核受體（VDRn）或膜受體（VDRm）結合，發揮相應的生物學效應。

25-（OH）-VD是機體維生素D的主要儲存形式, 占VD總量的95%以上。由于其半衰期長（2 ~ 3周）, 并且不受血鈣和甲狀旁腺素水平的影響, 因此被公認為是客觀評價體內VD含量的最佳指標。

體內25羥基維生素D含量（ng/ml） 臨床建議
<10 嚴重缺乏
10-20 缺乏
20-30 不足
30-100 正常

參考文獻

1.B. Oliveri, A.G. Díaz, M. González Pernas,等. Serum 25OHD levels in adults living in the city of Buenos Aires: Importance of vitamin D supplementation[J]. Bone, 2016, 89:64.
2.Adriana S. Dusso, Alex J. Brown, Eduardo Slatopolsky. Vitamin D[J]. 2005, 289(1):F8-28.
3.Lips, Paul, Graafmans, Wilco C. Vitamin D supplementation and fracture incidence in elderly persons[J]. Annals of Internal Medicine, 1996, 124(4):400-406.
4.向偉, 丁宗一, 鄭維. 維生素D及其受體與臨床相關疾病的研究[J]. 中華兒科雜志, 2004(7).

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